DNA測序服務
DNA測序
DNA測序(DNA sequencing,或譯DNA定序)是指分析特定DNA片段的堿基序列,也就是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)與鳥嘌呤的(G)排列方式??焖俚腄NA測序方法的出現極大地推動了生物學和醫學的研究和發現。
在基礎生物學研究中,和在眾多的應用領域,如診斷,生物技術,法醫生物學,生物系統學中,DNA序列知識已成為不可缺少的知識。具有現代的DNA測序技術的快速測序速度已經有助于達到測序完整的DNA序列,或多種類型的基因組測序和生命物種,包括人類基因組和其他許多動物,植物和微生物物種的完整DNA序列。
測序原理
化學修飾法測序原理
化學試劑處理末段DNA片段,造成堿基的特異性切割,產生一組具有各種不同長度的DNA鏈的反應混合物,經凝膠電泳分離?;瘜W切割反應:包括堿基的修飾修飾的堿基從其糖環上轉移出去在失去堿基的糖環處DNA斷裂。
Sanger法測序的原理
就是利用一種DNA聚合酶來延伸結合在待定序列模板上的引物。直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測定由一套四個單獨的反應構成,每個反應含有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基團,使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止。終止點由反應中相應的雙脫氧而定。每一種dNTPs和ddNTPs的相對濃度可以調整,使反應得到一組長幾百至幾千堿基的鏈終止產物。它們具有共同的起始點,但終止在不同的的核苷酸上,可通過高分辨率變性凝膠電泳分離大小不同的片段,凝膠處理后可用X-光膠片放射自顯影或非同位素標記進行檢測。
測序方法
生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸,每組寡核苷酸都有固定的起點,但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。
由于DNA上的每一個堿基出現在可變終止端的機會均等,因此上述每一組產物都是一些寡核苷酸混合物,這些寡核苷酸的長度由某一種特定堿基在原DNA全片段上的位置所決定。
在可以區分長度僅差一個核苷酸的不同DNA分子的條件下,對各組寡核苷酸進行電泳分析,只要把幾組寡核苷酸加樣于測序凝膠中若干個相鄰的泳道上,即可從凝膠的放射自影片上直接讀出DNA上的核苷酸順序。
測序服務類型
- DNA常規測序
- 復雜結構測序
- 噬菌體測序
- Primer Walking
對于常規的未知濃度的測序樣品,您可以選擇此項服務。
樣品的類型包括質粒、PCR產物(已純化PCR或無雜帶的PCR原液)、菌體(平板克隆或甘油菌)、具有環狀基因組的噬菌體(上清液或噬菌斑)。
由于二級結構或者其它內在因素的影響,復雜結構對于測序是巨大的挑戰。常規的測序方案往往容易出現提前中斷或者測序結果紊亂的現象。
以下幾種序列特點的樣品適合針對復雜結構的測序方案:
高GC含量:GC含量>60%的模板,或者局部高GC含量的模板
發夾結構:包含兩個反向重復序列,兩個重復序列之間間隔至少3個堿基
重復序列:2個或3個堿基的多個連續重復。
DNA發卡結構及RNAi 模板測序
RNA干擾(RNAi)是指雙鏈RNA(dsRNA)介導的特異性抑制某相關基因表達的一種機制。它逐漸發展為一種研究基因功能的快速有效的新興技術。
RNAi模板,由于其存在 “發卡結構”,給測序工作帶來了很大挑戰。在RNAi研究中采用的小發卡RNA(shRNA)通常無法測序成功,測序結果往往提前中斷或者信號紊亂。強耀生物擁有專門針對shRNA模板的測序方案,測序結果得到客戶的一致認可。
強耀生物的測序方案可以對環狀基因組的噬菌體(噬菌體上清或者噬菌斑)直接測序。當難以獲得足夠量的測序用噬菌體DNA樣品時,該操作為您省掉DNA制備的繁瑣過程,并能獲得高質量的測序結果。
本項服務包括:
- 節約時間和成本-無需菌液培養和DNA制備
- ABI3730xl DNA序列分析儀進行序列分析
- Phred20有效長度大于600bp
- 免費提供強耀生物通用引物
- 您可以選擇在線提交訂單,強耀生物CLIMS系統將長期保存您的訂單信息以及測序結果
- 強耀生物的技術支持會針對項目中的問題及時與您溝通
強耀生物可以通過Primer Walking測序,幫助您獲得未知克隆的序列信息,或者驗證克隆序列的準確性。如果您提供參考序列,我們可以一次完成長片段克隆的全長測序。
本項服務包括:
- 引物設計并合成
- 根據序列圖譜進行人工編輯
- 序列拼接
- 發送拼接序列結果
DNA測序服務優勢
快速 - 專業的測序設備,保證大量樣品的快速測序
復雜結構的佳測序方案
免費的通用引物
專業的技術支持
為了滿足您更多的需求,強耀生物也為您提供引物合成服務、基因合成服務、蛋白表達、以及抗體定制服務。